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1．多樣化的噬菌體抗體丈庫中制備噬菌體抗體。2．根據廠家說明，對抗原進行生物素化。3．選擇前，在1個1．5m1微量離心管中．用2％MPBS1m1封閉150ul鏈霉親和素磁珠，室溫1小時。用磁性試管架將碰珠吸向一側。棄去緩沖液。4．用2％MPBS封閉3個1．5m1微量離心管，室溫1小時；而后，棄去封閉緩沖液。以3個不同濃度將士物素化抗原（總共3管）與溶于2％MPDS（終濃度）的1m1噬茼體樣品（大約1012c{u／m1）進行孵育，室溫振蕩l小時。對于*輪選擇，抗原濃度應分別為K...
選擇3～5輪后，隨機挑取克隆加入96孔微量滴定板中并誘導表達可溶性scFv。然后，在包被有相關抗原的96孔微量滴定板中，用ELISA分析含有可溶性scFv的細菌上清。此過程可以識別出那些結合了抗原的scFv。但即便采用上述嚴謹性選擇后，ELISA陽性克隆中僅有部分克隆的親和力比野生型高。ELISA信號強度不能很好地顯示哪個克隆具有較低的Ka值，而且更為普遍的是它與scFv表達水平相關。因此，這就需要一種篩選ELISA陽性克隆的技術，能識別出具有較低Ka值的克隆。競爭性或抑制性...
A液（80ml）：1％氯化金，lml；雙重蒸餾水，79ml。B液（20m1）：1％檸檬酸鈉，4ml；1％單寧酸，0.lml；雙重蒸餾水，15．8ml。25mmol/LK2C03，0．1ml；將上述A液加熱到60℃，然后將B液快速加入到A液中，繼續攪拌，在極短的時間內加熱到煮沸（大約10min），此時顏色由黑一藍一亮紅（近似紅葡萄酒顏色）變化。pH調到所需要求（根據所標記蛋白質種類的不同，所需的pH也不一樣）。上述用量合成的膠體金為10nm，根據所加入鞣酸（或稱單寧酸）量的不同...
乙醇—超聲波還原法（Baigent和Muller，1980）（1）取1％AuCl3·HCl水溶液lml加入100ml雙重蒸餾水。（2）用0．2m01/LK2C03調pH至7．2，再加入lml無水乙醇。（3）用20KC、135W超聲波探頭浸入溶液內進行超聲振蕩，此法制備的顆粒為6～10nm。硼氫化鈉還原法（Tschopp等，1982）（1）取0．6ml1％氯化金水溶液，加入40ml預冷（4℃）雙蒸餾水。（2）再加入0．2mol/LK2C030．2ml。（3）邊攪拌邊加入新鮮配制...
『安全』是進行任何實驗zui重要的考量，若不留意，經常會造成*的遺憾，因此，請遵守以下各項規定：1.請事先勘查緊急沖洗站、洗眼臺及滅火器的位置。2.請避免穿著涼鞋或拖鞋（腳趾不要裸露），并請穿著實驗衣。留長發者，在實驗進行前將頭發束好。3.在實驗室請勿吸煙、化妝、嚼口香糖、吃東西、喝飲料。食物不可存放于實驗室的冰箱中。4.實驗前后請將工作區域清理擦拭干凈，實驗中打翻任何藥品試劑時，要隨時清理；離開實驗室前請記得洗手。5.使用刻度吸管時，切勿用嘴吸取，請用安全吸球或吸管唧筒。6...
微量移液器（micropipet）是進行生化實驗或分子生物學實驗的*工具，然而使用方法的正確與否，以及微量移液器的準確性，都直接影響了實驗結果的正確性，故請對你持有之微量移液器作深入的認識。本實驗室所使用的微量移液器為GilsonPipetmanP系列，包括P1000,P200,P20等。以下使用方法及注意事項，部份取材自原廠所附說明書，請詳讀之后才進行實驗。1）請參照圖1.1，認識微量移液器每一部份組件之位置及名稱。2）將D（ejector）取下，C（connectingn...
儀器用具：迷你電泳槽及鑄膠器（MupidII）；UVtransilluminator及影像分析系統；防護面罩藥品試劑：瓊脂糖粉末（agarose,lowEEO）1×TAE電泳緩沖液（40mMTris-acetate,1mMEDTA,pH8.0）：由50×TAE（每1L含242gTrisbase,57.1mLglacialaceticacid,100mL的0.5MEDTA-8.0）稀釋使用。10×追蹤染劑（0.25%bromophenolblue,0.25%xylenecyan...
儀器用具：37℃及65℃水浴或恒溫槽藥品試劑：質體pBluescriptIISK（-）限制酶：BamHI,PvuII及ScaI（濃度均為10units/μL,Invitrogen）10×Reactionbuffer6（0.5MTris-HCl,pH7.4;60mMMgCl2;0.5MNaCl;0.5MKCl）無菌水方法步驟：1）取7支微量離心管，依下表所列體積（單位μL）依序加于管壁不同位置上。◆每次吸取限制酶時，請換一支新的微量移液器頭以免造成污染。總體積為20μL，短暫離...
當前位置：
