利用血清篩選噬菌體文庫交叉抑制實驗

[器材和試劑]
● 多孔板（Immuno plate Maxisorp，Nuno）
● TBS
● PEG—純化噬菌體
● PBST
● 封閉液（含5％脫脂牛奶，0．05％Tween—20，0．02％NaN3的PBS）
● XLl—Blue細菌提取物
● 堿性磷酸酶標記的羊抗人IgG（Fc特異性）抗體（Sigma）
● 底物緩沖液（10％二乙醇胺，0．5mmmol/L Mg-2，0．05％NaN3， 用HCl調節(jié)至pH 9．8）
● 顯色液（在底物緩沖液中加1mg/ml p硝基苯磷酸）
● 自動酶標儀

[方法]
1．將100ul含有2 ×1010個PEG—純化噬菌體顆粒的TBS，等量分加到多孔板各孔中，4℃孵育12小時。
2．用PBST洗滌數次，在室溫下每孔加250/ll封閉液封閉2小時。
3．用封閉液稀釋血清，其中含1×1010個/mlMl3噬菌體顆粒、50ul/ml的XLl—Blue細菌提取物以及2×1011個顆粒/ml PEG純化抑制子噬菌粒克隆， 室溫預孵育3小時。
4．除去板中封閉液，將預孵育的血清混合物加到噬菌體包被孔中，并在室溫下孵育3小時。
5．用PBST充分洗滌。
6．每孔加100ul堿性磷酸酶標記二抗，用封閉液按l：5000比例稀釋，并在室溫下孵育2小時。
7，用PBST洗板數次，用底物緩沖液洗滌一次。
8．每孔加入100ul含lmg/ml p硝基苯磷酸的底物緩沖液，以顯示堿性磷酸酶反應。

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