制備用于抗原上選擇的噬菌體抗體

       抗體文庫儲存料中制備噬菌體。在開始實驗之前，先用滴定法（在TYE/amp/glu平板上系列稀釋鋪板）計算每毫升抗體文庫儲存料中細菌的數目。在600nm（A600）處的某個特定吸光值下，抗體文庫中細菌數目較未感染細菌數目低一些。這或許是因為含有質粒的文庫細菌體積更大，或者是存在死細菌。一旦滴度與A600確定關系，吸光值即可用于細菌數目的計算。對于噬菌體的制備（文庫救援），來自文庫儲存料的起始接種量應比文庫容量大5倍。接種到培養基后，細菌濃度的A600不應超過0．05。采用文庫容量5倍以上的細菌接種以確保它能呈現出文庫中的所有成員。而培養起始的A600小于0．05，則可以確保輔助噬菌體加入前處于多倍增長期，以提高輔助噬菌體感染的有效性。用于救援的zui小培養體積必須根據文庫容量和0．05的zui大起始A600值來確定。例如，含有1．0×l010個成員的抗體文庫所需要的起始接種量為5．0×l0l0個細菌。因為1．0A600＝1．0×109，為保證起始培養液A600值小于0．05，則需要1L的培養體積。此體積的培養液應平均分到兩個含有250ml 2×TY/amp/glu培養基的2L錐形瓶中。葡萄糖會抑制pⅢ的表達，但允許纖毛的表達。

使用新鮮制備的噬菌體才會得到*選擇結果。這是因為即便在-80℃下保存，展示抗體也會隨時間的推移而出現緩慢的蛋白水解。應用氯化銫梯度離心法純化菌體，能顯著降低蛋白的水解。這樣純化后，蛋白質會非常穩定。預期產量是每毫升原始培養液產生（1～5）×101l個噬菌體，而氯化銫純化后產量會下降50％。

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