檢測大腸桿菌的分子生物學方法

傳統的細菌分離、培養及生化反應，已遠遠不能滿足對各種病原微生物的診斷以及流行病學的研究。隨著現代科學技術的不斷發展，特別是免疫學、生物化學、分子生物學及計算機技術的不斷發展，新的微生物診斷技術和方法已廣泛被應用。近來國內外學者不斷努力，已創建不少快速、簡便、特異、敏感、低耗且適用的微生物診斷方法，尤其是DNA探針和以PCR為代表的分子生物學技術的發展及自動化儀器的應用已明顯加快了微生物檢驗的速度，明顯提高了微生物的診斷水平。

近年文獻表明，核糖分型不能用來鑒定EHEC0157：H7血清型之間的菌株。脈沖場凝膠電泳（pulsed-fieldgelelectrophoresis，PFGE）和噬菌體分型是zui有價值的鑒定技術，PFGE作為一種DNA指紋圖被廣泛利用，且優于其他DNA分析方法，它已成功地應用于對部分菌落進行分類。

將檢查的VT基因型以PCR底物酶切后，經PFGE分析其限制性片段長度的多態性。Bohn和Karch用此法證實了德國一次流行的26個菌株為相似的譜型。蘇格蘭的Krause用此法分析的124個菌株，可分為12個噬菌體型，其中2型和49型占所研究噬菌體型的63．7％。

據報道，現已確定66種噬菌體型，應用噬菌體分型在美國分出24個型，流行株以1型、2型、4型、49型為主。加拿大暴發分離的13個菌株和美國內布拉斯分離的3個菌株均為1型，美國北卡羅來那洲暴發分離的4個菌株為2型。因此，噬菌體分型對預測VT有一定的參考價值。不同的噬菌體產生VT的特點不同，既能產生VTl，又能產生VT2的有1型、8型、14型，而2型、49型只產生VT2。
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