酶聯(lián)法檢測(cè)血吸蟲抗體

    [方法學(xué)原理]  將血吸蟲可溶性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)形成固相抗原，加待檢血清，如血清中有特異性抗體則與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物；再加HRP標(biāo)羊抗人IgG抗體，形成固相抗原—抗體—羊抗人IgG酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，在此基礎(chǔ)上加酶底物顯色，顏色深度與抗體含量成正比。

    [標(biāo)本準(zhǔn)備]  不抗凝靜脈血2ml

    [試劑]

    1．日本分體血吸蟲可溶性抗原

    2．HRP標(biāo)記羊抗人IgG

    3．0．05mmol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液

    4．稀釋液和洗滌液

    5．酶底物液

    6．2mol／LH2504溶液

    7．正常人（陰性對(duì)照）血清

    [檢測(cè)步驟]

    1．日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原用pH9．6碳酸鹽緩沖液作1：3 000稀釋，包被反應(yīng)板，每孑岫口lOOtA，置4℃環(huán)境中過(guò)夜。

    2．用前洗滌包被板3min× 3，加被檢血清，每份標(biāo)本做3孔，每孔lOOgl，另加正常人（陰性對(duì)照）血清2孔。37C環(huán)境中保溫2h，洗滌3minX3。

    3．加HRP-抗人IgG，每孔100gl，37℃環(huán)境中放置2h，洗滌3rainX3。

    4．加酶底物液每孔100~1，于室溫環(huán)境中避光保存30min，各孔加2mol／L H₂S0₄ 1滴終止反應(yīng)，用酶標(biāo)比色儀490nm測(cè)各孔A值。

    [參考范圍]  血吸蟲抗體陰性

    [注意事項(xiàng)]

    1．待檢血清應(yīng)新鮮或冰凍保存，不能污染。

    2．在實(shí)驗(yàn)室的全部洗滌過(guò)程中，清洗要*，以除去末參與反應(yīng)的所有物質(zhì)。

    3．試劑盒應(yīng)保存于4一-20C冰箱中，用前取出，待試劑恢復(fù)至室溫后使用。

    [臨床意義]  糞便中蟲卵陽(yáng)性者血清中抗體檢出率為97％以上，正常人有2％～3％假陽(yáng)性。不同種屬寄生蟲無(wú)明顯交叉反應(yīng)。1979年，Tamaka應(yīng)用ELISA間接法測(cè)日本分體血吸蟲患者抗體陽(yáng)性率為100％。本法具有高度的敏感性，但有1％一2．3％假陽(yáng)性，對(duì)同種屬曼氏和埃及血吸蟲有交叉反應(yīng)。