間接熒光抗體染色法檢測瘧疾

    [檢測方法] 

    [方法學(xué)原理]  抗原片上加患者血清，若血清中含有瘧原蟲抗體，即可與抗原結(jié)合成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物，此復(fù)合物再與熒光標記抗人IgG抗體結(jié)合，zui后通過熒光顯微鏡觀察熒光反應(yīng)。

    [試劑]

    1．0．01mol／LpH7．6 PBS

    2．熒光標記抗人IgG抗體

    3．陰性對照、陽性對照血清

    4．抗原片

    [檢測步驟]

    1．用鉛筆將抗原片（厚血膜）劃成12個小格，放置蒸餾水中浸泡2～3min，以脫去血紅蛋白，吹干。

    2．用無水乙醇固定10min，吹干。

    3．將被檢血清用PBS從1：10開始作倍比稀釋，將此稀釋血清分別加在小格中，每格1小滴，同時設(shè)陽性對照和陰性對照。

    4．將抗原片放濕盒中置37C環(huán)境中孵育30min，棄去殘余血清，用PBS洗3次，每次3min，用蒸餾水漂洗一遍以脫鹽，吹干。

    5．將已稀釋的熒光標記抗人IgG抗體加于各小格中心，每格1小滴，同上孵育，漂洗吹干，熒光顯微鏡檢。

    [結(jié)果判斷]  陽性結(jié)果小格內(nèi)有與原蟲胞漿結(jié)構(gòu)相似的明亮熒光；陰性結(jié)果原蟲胞漿結(jié)構(gòu)模糊無熒光。陰陽性對照結(jié)果無誤，實驗成立。

    [正常參考值]  正常人抗體效價≤1：10，但瘧疾流行區(qū)的正常人（成人）抗體效價稍高。

    [注意事項]

    1．具有較多裂殖體的血片，陽性檢出率高，因為瘧原蟲的裂殖體的抗原性zui強。

    2．采用厚血膜做抗原片時，經(jīng)溶血后瘧原蟲容易變形，故觀察結(jié)果時要認真辨認（必要時可做瑞氏染色對照）以排除非特異性熒光。

    3．加被檢血清時，要防止互相串格。

    [臨床意義]  被檢血清≥1：20陽性，表明瘧原蟲感染。流行區(qū)人們抗體陽性檢出率較高。有學(xué)者報道患者抗體陽性率為55．1％，明顯高于血膜染色檢查法（陽性率28．1％）。間日瘧患者經(jīng)*后熒光抗體的陽性率迅速下降。值得注意的是，已*10余年的人群中尚有8％的人存在低滴度抗體水平。由此可見，本試驗結(jié)果陽性的意義不在于診斷，而在于流行病學(xué)調(diào)查。