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          間接熒光抗體染色法檢測瘧疾

          更新時間:2012-10-10點擊次數:3108

          瘧疾(malaria)是瘧原蟲經按蚊叮咬傳播的傳染病,臨床上以間歇性寒戰、高熱、大汗和脾大、貧血等為特征,惡性瘧疾能引起兇險發作。常見檢測方法為間接熒光抗體染色法檢測瘧原蟲抗體。

              [檢測方法] 
              [方法學原理]  抗原片上加患者血清,若血清中含有瘧原蟲抗體,即可與抗原結合成相應的抗原抗體復合物,此復合物再與熒光標記抗人IgG抗體結合,zui后通過熒光顯微鏡觀察熒光反應。
              [試劑]
              1.0.01mol/LpH7.6 PBS
              2.熒光標記抗人IgG抗體
              3.陰性對照、陽性對照血清
              4.抗原片
              [檢測步驟]
              1.用鉛筆將抗原片(厚血膜)劃成12個小格,放置蒸餾水中浸泡2~3min,以脫去血紅蛋白,吹干。
              2.用無水乙醇固定10min,吹干。
              3.將被檢血清用PBS從1:10開始作倍比稀釋,將此稀釋血清分別加在小格中,每格1小滴,同時設陽性對照和陰性對照。
              4.將抗原片放濕盒中置37C環境中孵育30min,棄去殘余血清,用PBS洗3次,每次3min,用蒸餾水漂洗一遍以脫鹽,吹干。
              5.將已稀釋的熒光標記抗人IgG抗體加于各小格中心,每格1小滴,同上孵育,漂洗吹干,熒光顯微鏡檢。
              [結果判斷]  陽性結果小格內有與原蟲胞漿結構相似的明亮熒光;陰性結果原蟲胞漿結構模糊無熒光。陰陽性對照結果無誤,實驗成立。
              [正常參考值]  正常人抗體效價≤1:10,但瘧疾流行區的正常人(成人)抗體效價稍高。
              [注意事項]
              1.具有較多裂殖體的血片,陽性檢出率高,因為瘧原蟲的裂殖體的抗原性zui強。
              2.采用厚血膜做抗原片時,經溶血后瘧原蟲容易變形,故觀察結果時要認真辨認(必要時可做瑞氏染色對照)以排除非特異性熒光。
              3.加被檢血清時,要防止互相串格。
              [臨床意義]  被檢血清≥1:20陽性,表明瘧原蟲感染。流行區人們抗體陽性檢出率較高。有學者報道患者抗體陽性率為55.1%,明顯高于血膜染色檢查法(陽性率28.1%)。間日瘧患者經*后熒光抗體的陽性率迅速下降。值得注意的是,已*10余年的人群中尚有8%的人存在低滴度抗體水平。由此可見,本試驗結果陽性的意義不在于診斷,而在于流行病學調查。
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