肝素-相關(guān)自身抗原

 

    肝素是一種天然產(chǎn)生的氨基葡聚糖，是由肝素蛋白轉(zhuǎn)錄后糖基化修飾而形成。肝素的非硫酸化前體主要由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺殘基交替構(gòu)成，經(jīng)過(guò)N端去乙酰化、N端硫酸化、差向異構(gòu)化和O端硫酸化后形成活性多聚體。這些結(jié)構(gòu)上的修飾程度不*相同，因而在每條多糖鏈上形成了不同數(shù)量的硫酸二糖單位。具有抗凝血活性的肝素含有一種特殊的五糖序列，這一序列可以與絲氨酸、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）的重要結(jié)構(gòu)性氨基酸殘基結(jié)合，結(jié)合后可以引起AT-Ⅲ可逆性變構(gòu)，以使其對(duì)諸如凝血酶、凝血因子FIXa和Xa等絲氨酸蛋白酶反應(yīng)的Km值降低。肝素分子通過(guò)在同一多糖鏈上結(jié)合抗凝血酶抑制物和蛋白酶、形成三元復(fù)合物來(lái)增加AT-Ⅲ分子的活性。商品化肝素主要由牛或豬的肺、腸內(nèi)肝素經(jīng)酶解、鹽析和凝膠色譜分離后得到。它是一種異源性的混合物，由分子量為5～30kD的多糖鏈（平均分子量為15kD且平均鏈長(zhǎng)度為50個(gè)單糖殘基）構(gòu)成。然而，在人體內(nèi)只有大約1／3的商品化肝素樣品與AT-Ⅲ高親和性結(jié)合并發(fā)揮活性。分子量為1-10kD的低分子量肝素（LMWH）可以通過(guò)酶解或化學(xué)解聚而產(chǎn)生，它可以保留抗Xa活性，但卻不能直接抑制凝血酶。

 

    血小板因子4（PF4），是一個(gè)由70個(gè)氨基酸肽組成的分子（分子量為7800）；它由巨核細(xì)胞產(chǎn)生后儲(chǔ)存于α-粒血小板中，當(dāng)血小板激活時(shí)釋放出來(lái)。除了拮抗胞質(zhì)內(nèi)肝素的活性外，PF4是中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的趨化因子，在體外是血管生成和巨細(xì)胞缺乏癥的一種抑制因子。利用PF4對(duì)肝素的高親和性，可以從體液中純化出PF4。基因重組型PF4可以在K．coli里表達(dá)并保留它天然蛋白的生物活性和抗原特性。PF4分子與肝素的結(jié)合區(qū)主要在其C末端（由一個(gè)。螺旋與兩個(gè)緊密連接的賴氨酸-賴氨酸殘基組成）。PF4分子還可與其他陰離子性的氨基硫酸鹽葡聚糖結(jié)合，只是親和力要較肝素為低。而肝素分子上與PF4的結(jié)合區(qū)并不包括與AT-Ⅲ結(jié)合的五糖序列，但這一區(qū)域包括一段長(zhǎng)為6個(gè)單糖的微小鏈。PF4與肝素結(jié)合的效率可以隨著低聚糖鏈的長(zhǎng)度的增加而增加。

 

    肝素／PF4復(fù)合物產(chǎn)生的HIT抗體對(duì)肝素／PF4復(fù)合物的親和力要遠(yuǎn)大于對(duì)每一單個(gè)成分的親和力，這可能是由于復(fù)合物在形成過(guò)程中改變了一個(gè)或兩個(gè)成分的構(gòu)象，或者是在兩個(gè)成分的交界面形成新的表位。這種復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)如下：每一單體由一個(gè)伸展的N-末端環(huán)插入一個(gè)由三個(gè)反向平行束和一個(gè)。螺旋C末端組成的β-片層折疊的方向平行構(gòu)象的連接形成；四聚體則由兩個(gè)二聚體組成，具有由突出于蛋白質(zhì)分子表面的γ螺旋和β-片層折疊形成的“三明治”結(jié)構(gòu)。