酶活性分析法檢定蛋白質(zhì)

方法步驟：
1） 吸取20 μL 的蛋白質(zhì)樣本，小心注入微量滴定盤中，避免氣泡產(chǎn)生。
2） 每一樣品槽加入200 μL 基質(zhì)液，混合均勻；可用燒熱的接種環(huán)去除氣泡。
3） 靜置約1~2 min，顏色開始加深，然后加入30 μL 終止液。 反應(yīng)時(shí)間的長短，要以樣本中的酶活性大小來做調(diào)整。因?yàn)槲覀冎粶y(cè)定色析法各分劃的相對(duì)酶活性，因此并不加終止液。
4） 以ELISA 光度計(jì)測(cè)定波長415 nm 的吸光值。

酶活性單位的測(cè)定：
a. 以上步驟，只可測(cè)定GUS 活性的相對(duì)大小，對(duì)色析法所得到的各個(gè)分劃進(jìn)行偵測(cè)，相當(dāng)方便，但并非酶活性單位的測(cè)定方法。
b. 若要測(cè)定酶的活性單位，要使用zui適當(dāng)?shù)拿赣昧浚姑冈诜磻?yīng)一段固定的時(shí)間后，其生成物的呈色吸光度，落在光度計(jì)的可測(cè)范圍的內(nèi)；然后計(jì)算此段時(shí)間內(nèi)，每分鐘所產(chǎn)生的吸光度增加量，轉(zhuǎn)換成生成物的莫耳數(shù)，即可求得其真正的活性單位。
c. 因此酶的活性單位定義為：每分鐘所能催化生成物的 μmole 數(shù)。

www.sydney4dlotto.com