重組質(zhì)體的限制酶分析

    儀器用具：

    微量離心機(jī)

    冰浴

    Mupid II 迷你電泳槽及鑄膠器

    UV transilluminator 及影像分析系統(tǒng)

    防護(hù)面罩

 

    藥品試劑：

    限制酶：BamHI, HindIII （20 U/μL, BioLabs）

    10×NE Buffer BamHI （0.1 M Tris-HCl, pH 7.9; 0.1 M MgCl2; 1.5 M NaCl; 10mM dithiothreitol）

    100×BSA （10 mg/mL bovine serum albumin） 使用前稀釋十倍成10×無(wú)菌水

 

    方法步驟：

    1） 正反應(yīng)株，接種于3 mL LB/Amp 培養(yǎng)基，于37℃震蕩培養(yǎng)過(guò)夜后，以2.1 的方法抽取質(zhì)體。

    2） 每一株每反應(yīng)各取3 μL 質(zhì)體，另取pQE31 及pBlueGus 每反應(yīng)各3 μL，分別依下表進(jìn)行HindIII 及BamHI 切割。

    3） 以1% agarose gel 進(jìn)行電泳分析，由電泳圖譜挑選帶有gus DNA 片段的重組質(zhì)體。

??  照相后的電泳膠片不要丟掉，可繼續(xù)進(jìn)行Southern 轉(zhuǎn)印。

    限制酶分析請(qǐng)依照下列表格加入：

     # 各管置請(qǐng)于37℃反應(yīng)至少1 h。