使用 dsGreen 對(duì)凝膠進(jìn)行 DNA 染色

dsGreen 是一種特異性結(jié)合雙鏈 DNA 的熒光染料。染色方案有三種變體：凝膠浸泡、凝膠預(yù)染色和樣品預(yù)染色。

凝膠浸泡

瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠的經(jīng)典方法。

1. 在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中運(yùn)行樣品。

2. 在燒杯中，將 10 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 100 mL 1× TE、TBE 或 TAE 緩沖液（對(duì)于小型凝膠），或?qū)?50 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 500 mL 1 × TE、TBE 或 TAE 緩沖液（用于中型凝膠）。用抹刀、棒或磁力攪拌器充分混合。

3. 將稀釋的 dsGreen 溶液倒入適當(dāng)?shù)耐斜P或平底鍋中，并浸沒凝膠。

4. 將凝膠浸泡 5-10 分鐘。

5. 使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠。藍(lán)光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠。也可以使用高壓汞燈（365 nm），但這種光源的激發(fā)效率稍低。

凝膠預(yù)染色

該方法僅適用于瓊脂糖凝膠，不適用于 PAAG。注意——這種染色方法有時(shí)會(huì)導(dǎo)致條帶變形或形成污點(diǎn)。在這種情況下使用凝膠浸泡。

1. 使用微波爐或加熱裝置將緩沖液中的瓊脂糖煮沸至溶解。

2. 在仍為液體時(shí)，每 10 mL 凝膠溶液添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液。充分混合。

3. 倒入凝膠并使其凝固。

4. 為了獲得最佳結(jié)果，在陽極附近每 10 mL 緩沖液中添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO溶液（“+"，紅線）。

5. 運(yùn)行示例。可以在 254 nm 低壓汞燈下實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)遷移帶。

6. 使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠。藍(lán)光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠。也可以使用高壓汞燈（365 nm），但這種光源的激發(fā)效率稍低。

樣品預(yù)染色

不敏感、且經(jīng)濟(jì)的方法。

1. 在 DMSO 中混合 25 µL DMSO 和 1 µL 10,000× dsGreen 溶液。

2. 將 1 µL 溶液添加到每個(gè)要在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠上分離的樣品中。

3. 運(yùn)行示例。可以在 254 nm 低壓汞燈下實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)遷移帶。

4. 使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠。藍(lán)光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠。也可以使用高壓汞燈（365 nm），但這種光源的激發(fā)效率稍低。